植物内生菌腺苷脱氨酶抑制剂的筛选及抗肿瘤活性评价

题名	植物内生菌腺苷脱氨酶抑制剂的筛选及抗肿瘤活性评价
作者	唐鹏
导师	张新国
答辩日期	2016
学位名称	硕士
关键词	内生菌分离鉴定 ADA抑制剂跟踪分离抗肿瘤活性
摘要	植物内生菌是一个天然的巨大药用资源库。其代谢产物的丰富多样性,为寻找和开发天然药物提供了新途径和新思路。ADA是嘌呤核苷代谢酶类,能不可逆地催化腺苷代谢产生肌苷和次黄苷,从而在维持机体正常机能方面发挥着重要的作用。研究发现,人体多数疾病与机体腺苷异常有关,特别是恶性肿瘤、病毒性疾病和免疫系统疾病等。目前,多数ADA抑制剂因各自不同程度的缺陷,如在不同的细胞具有不可逆性、副作用、高毒性等,极大的限制了其在临床上的应用。鉴于此,本论文以20种药用植物种子和6种药用植物为材料,对其内生菌代谢产物的ADA抑制活性成分进行了研究。并取得了如下结果:植物内生菌的分离和ADA酶抑制活性菌株的筛选鉴定。实验运用组织匀浆法并结合划线分离,从20种药用植物种子和6种药用植物中分离获得182株内生菌。随后以PDA为培养基摇瓶发酵,发酵液用乙酸乙酯萃取,最终得到了182种内生菌发酵液提取物样品。用分光光度法,将提取物进行了ADA抑制活性测定。发现ADA抑制率在50%以上的有56种、70%以上的有22种、90%以上的有4种。分别占总数的30.77%、12.08%和2.19%。其中WT-9菌株和QJ-4菌株发酵液提取物活性最高,在浓度为1mg/ml时抑制率分别为97.05%和95.67%。通过显微形态学观察、18s rDNA分子生物学鉴定以及构建系统发育树分析,最终确定内生菌WT-9菌株和QJ-4菌株分别为Cochliobolus sativus strain和Aspergillus niger strain。ADA抑制活性组分的跟踪分离。运用硅胶柱色谱、薄层层析色谱、凝胶色谱以及高效液相色谱等分离方法,对WT-9菌株和QJ-4菌株发酵液乙酸乙酯部位ADA活性化合物进行追踪分离。结合1H-NMR、13C-NMR等波谱解析方法,鉴定了11个化合物。分别为:deoxycholic Acid（H1）、13β,14β-androstan-17-one（H2）、5-Hydroxy-2-hydroxymethyl-4H-pyran-4-one（H3）3β-O-cis-p-Coumaroyl-2α-hydroxy-urs-12-en-28-oic acid（H4）、diglucosyldirhamnoside（H5）、1,3-diacyl glycerol（H6）、methyl 11-hydroxyhexadecanoate（H7）、lupinine（H8）3-（4-nitrophenyl）-5-phenylisoxazole（H9）、kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside（H10）、myricetin（H11）。化合物ADA抑制活性测定结果显示,WT-9菌株中化合物H3和QJ-4菌株中化合物H9对ADA具有较好的抑制活性,其IC50值分别为31μg/ml和908μg/ml。根据Lineweaver-Burk双倒数曲线法对其酶抑制类型的鉴别的结果显示,其抑制类型分别为混合型抑制和反竞争性抑制。MTT法评价化合物的抗肿瘤活性。利用抗肿瘤活性评价的经典方法-MTT法,对化合物H3和化合物H9进行抗HepG2肿瘤细胞活性实验,结果显示化合物H3和化合物H9分别在72 h和48 h内具有很好的剂量-时程-效应关系。在72 h内,其IC50分别为0.385μg/ml和0.165μg/ml,显示了较好的抗肿瘤活性。总之,本论文以植物内生菌为资源,利用ADA酶抑制筛选寻找抗肿瘤药物提供了思路,同时所得化合物H3有望开发成为新的腺苷脱氨酶抑制剂。
页数	68
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语种	中文
收录类别	CNKI
中图分类号	TQ464
文献类型	学位论文
条目标识符	https://ir.lut.edu.cn/handle/2XXMBERH/94395
专题	兰州理工大学
作者单位	兰州理工大学
第一作者单位	兰州理工大学
推荐引用方式 GB/T 7714	唐鹏. 植物内生菌腺苷脱氨酶抑制剂的筛选及抗肿瘤活性评价[D],2016.