胶孢炭疽菌中分离的化合物及其制备方法与用途

	胶孢炭疽菌中分离的化合物及其制备方法与用途
	杨中铎; 陈效威
	2020-06-05
专利权人	兰州理工大学
公开日期	2020-06-05
授权国家	中国
专利类型	授权发明
摘要	本发明公开了一种胶孢炭疽菌中分离的化合物及其制备方法与用途，所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的分子式为：C15H22O3，所述化合物的制备方法为：取已冻存好的胶孢炭疽菌菌株活化，将活化的菌株接种至培养基培养，配制PDB液体培养基，灭菌；另无菌水溶解青霉素、链霉素各一瓶，加入发酵罐中；再将所述灭菌后培养物接入发酵罐中发酵；发酵结束后将所得发酵产物抽滤得菌丝体。再进行萃取、浓缩后得到菌液提取物；将粗提物进行柱层析、洗脱、湿法装柱，再次洗脱，硅胶柱层析，再用石油醚‑丙酮洗脱液进行洗脱、柱层析、氯仿‑甲醇洗脱脱色，分离得化合物胶孢炭疽菌素甲。本发明提供的化合物，可用于制备抗老年痴呆药物。
申请日期	2017-03-28
优先权日	2017-03-28
预估到期日	2037-03-28
语种	中文
专利状态	授权
申请号	CN201710213416.5
公开（公告）号	CN106966887B
IPC 分类号	C07C49/743 ; C07C45/78 ; C07C45/79 ; A61P25/28 ; C12P7/26 ; C12R1/645
专利代理人	汤东凤
代理机构	北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
CPC分类号	C07B2200/07 ; C07C45/78 ; C07C45/79 ; C07C49/743 ; C12P7/26
权利要求	1.一种胶孢炭疽菌中分离的化合物，其特征在于，所述化合物命名为胶孢炭疽菌素甲，分子式为：C15H22O3，结构式如下： 2.一种如权利要求1所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的制备方法，包括以下步骤： (1)胶孢炭疽菌的发酵 a.菌株活化：取已冻存好的胶孢炭疽菌菌株，在超净工作台中接种至PDA固体培养基的平板上，28℃恒温培养箱中培养7天； b.接种及菌株的一级发酵：将活化的菌株接种至装有200mL PDB液体培养基的500ml锥形瓶中，共设12瓶，置于28℃恒温气浴旋转式摇床培养； c.菌株的大批量发酵：配制PDB液体培养基共计45L，进行灭菌，灭菌结束后冷却培养基至室温；另无菌水溶解青霉素、链霉素各一瓶，加入发酵罐中；再将菌株一级发酵培养物接入发酵罐中，保持28℃，控制通气量和保持发酵液循环，发酵21天，得菌液； (2)胶孢炭疽菌次级代谢物的提取发酵结束后将所得发酵产物抽滤，分别得到深褐色滤液和黑色菌丝体；发酵液50L用等体积的有机溶剂萃取三次，合并有机层，减压浓缩，得到菌液提取物； (3)菌液提取物次级代谢产物的分离 a.将粗提物用HPD-100大孔树脂进行柱层析，配制乙醇体积含量分别为0％、10％、30％、50％、70％、90％、100％的乙醇-水洗脱液，依次进行梯度洗脱，然后弃去水洗脱部分，TLC检测跟踪合并，得到6个组分，分别记为：Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5、Fr.6； b.取50g的MCI-gel湿法装柱，称取2g Fr.4样品湿法上样，配制甲醇与水体积比分别为0:100，20:80，40:60，60:40，80:20，100:0的甲醇-水洗脱液，依次进行梯度洗脱，每个梯度用5L洗脱液洗脱，每250ml收集浓缩一次，TLC检测合并得到7个粗组分，分别记为：Fr.4-A、Fr.4-B、Fr.4-C、Fr.4-D、Fr.4-E、Fr.4-F、Fr.4-G； c.选取Fr.4-B进行硅胶柱层析，所述硅胶目数为200～300目，用石油醚-丙酮洗脱液进行洗脱，TLC点板合并，再用sephdex LH-20柱层析,然后用氯仿-甲醇洗脱液进行洗脱脱色，脱色后用高效液相色谱进行分离，收集tR＝45min的峰得到胶孢炭疽菌素甲。 3.根据权利要求2所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)b中，所述恒温气浴旋转式摇床的转速为160r/min，培养时间为10天，发酵总体积为2.4L。 4.根据权利要求2所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)c中，所述灭菌是在蒸气发生装置上灭菌，灭菌温度为115-118℃，灭菌时间为2.5h。 5.根据权利要求2所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)c中，所述灭菌是在空气过滤器用灭菌锅中进行的，灭菌温度为121℃，灭菌时间为20min。 6.根据权利要求2-5任意一项所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)c中，所述石油醚-丙酮洗脱液中石油醚与丙酮的体积比为20:1，所述氯仿-甲醇洗脱液中氯仿与甲醇的体积比为1:1。 7.根据权利要求6所述胶孢炭疽菌中分离的化合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)c中，所述高效液相色谱的流速为2ml/min，流动相为48％的甲醇，检测波长为210nm，色谱柱为Gemini-NX柱。 8.一种如权利要求1所述的胶孢炭疽菌中分离的化合物的应用，其特征在于，所述化合物在制备抗老年痴呆药物方面的用途。
引用专利	CN102653720A;CN102911040A;CN102936252A;CN105503531A;KR1020010025876A
被引用专利数量	0
简单法律状态	有效
文献类型	专利
条目标识符	https://ir.lut.edu.cn/handle/2XXMBERH/108834
专题	兰州理工大学
推荐引用方式 GB/T 7714	杨中铎,陈效威. 胶孢炭疽菌中分离的化合物及其制备方法与用途[P]. 2020-06-05.