一种固定化青霉素G酰化酶及其制备方法

	一种固定化青霉素G酰化酶及其制备方法
	陈振斌; 柳春丽; 周永山; 张定军; 李慧; 吴翠玲
	2023-05-30
专利权人	兰州理工大学
公开日期	2023-05-30
授权国家	中国
专利类型	授权发明
摘要	本发明一种固定化青霉素G酰化酶及其制备方法，属于固定化酶技术领域。所述固定化青霉素G酰化酶为具有纳米囊性结构的Fe3O4@PTA‑PGA/PDA，是由Fe3O4 NPs固定化PGA和包覆在所述Fe3O4 NPs固定化PGA表面的PDA涂层制成，所述Fe3O4 NPs的表面负载有PTA。制备方法为：用TA对Fe3O4 NPs进行表面修饰，制备得Fe3O4@PTA NPs；将所述Fe3O4@PTA NPs作为载体对PGA进行固定化，制备得Fe3O4@PTA‑PGA NPs；用DA对所述Fe3O4@PTA‑PGA NPs进行表面包覆，即得。本发明的固定化青霉素G酰化酶具有良好的pH稳定性和温度耐受性，且操作稳定性和重复利用率较好，具有很高的工业应用价值。
申请日期	2020-05-26
优先权日	2020-05-26
预估到期日	2040-05-26
语种	中文
专利状态	授权
申请号	CN202010454547.4
公开（公告）号	CN111549022B
IPC 分类号	C12N11/14 ; C12N9/84
专利代理人	洪中清
代理机构	温州市品创专利商标代理事务所(普通合伙)
CPC分类号	C12N11/14 ; C12N9/84 ; C12Y305/01011
权利要求	1.一种固定化青霉素G酰化酶，其特征在于，所述固定化青霉素G酰化酶具有纳米囊性结构，其包括： Fe3O4NPs固定化PGA，所述Fe3O4NPs的表面负载有PTA；以及包覆在所述Fe3O4NPs固定化PGA表面的PDA涂层，其中PTA为聚单宁酸，PGA为青霉素G酰化酶，PDA为聚多巴胺。 2.一种固定化青霉素G酰化酶的制备方法，其特征在于，包括：采用TA对Fe3O4NPs进行表面修饰，制备得Fe3O4@PTANPs；将所述Fe3O4@PTANPs作为载体对PGA进行固定化，制备得Fe3O4@PTA-PGANPs；采用DA对所述Fe3O4@PTA-PGANPs进行表面包覆，制备得Fe3O4@PTA-PGA/PDA，即为固定化青霉素G酰化酶，其中TA为单宁酸，DA为多巴胺。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，制备Fe3O4@PTANPs，包括：将Fe3O4NPs分散在蒸馏水中，并在40℃的恒温水浴中通N230min；向Fe3O4NPs的水分散液中加入TA水溶液，并在N2保护下进行反应2h；反应结束后对产物进行分离，并用蒸馏水洗涤分离出的产物，直至洗涤所述产物的洗涤液在275nm处的吸光度小于0.005，所述吸光度采用紫外分光光度法进行测定，即得Fe3O4@PTANPs。 4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，还包括：在40℃的温度下，对制备的Fe3O4@PTANPs进行真空干燥至恒重。 5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，制备Fe3O4@PTA-PGA/PDA，包括：将Fe3O4@PTA-PGANPs分散在PBS缓冲液中；向Fe3O4@PTA-PGANPs/PBS溶液中加入DA，在25℃恒温水浴中，搅拌下进行聚合反应4-9h；反应结束后，对产物进行分离，并用PBS缓冲液洗涤分离出的产物，直至洗涤所述产物的洗脱液在507nm处的吸光度小于0.005，所述吸光度采用紫外分光光度法进行测定，即得Fe3O4@PTA-PGA/PDA。 6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括：在40℃的温度下，对制备的Fe3O4@PTA-PGA/PDA进行真空干燥。 7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述PBS缓冲液的浓度为40mmol/mL，pH＝8.0。 8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，进行聚合反应的时间为4h。 9.根据权利要求1所述的固定化青霉素G酰化酶，其特征在于，所述Fe3O4NPs的平均粒径为9.13nm。
引用专利	CN101250247A;CN102703412A;CN107177585A;CN107916259A;CN113462680A;IN192166B;US6060268A
被引用专利数量	0
简单法律状态	有效
文献类型	专利
条目标识符	https://ir.lut.edu.cn/handle/2XXMBERH/107535
专题	材料科学与工程学院
推荐引用方式 GB/T 7714	陈振斌,柳春丽,周永山,等. 一种固定化青霉素G酰化酶及其制备方法[P]. 2023-05-30.